抗体药物研发服务平台--羊驼免疫纳米抗体文库定制

一、服务简介

  纳米抗体(nanobody,Nb)，即重链单域抗体VHH(variable domain of heavy chain of heavy

chainantibody)，该类抗体只包含一个重链可变区(VHH)和CH2，CH3区，相比于其他抗体，轻链天然缺失。纳米抗体晶体直径2.5nm，长4m，是自然存在的可以和抗原结合的最小片段。

二、纳米抗体的应用

  纳米抗体能用于构建多重不同类型的分子结构，在医学诊断和治疗上实用性较高。例如可以构建成双功能抗体或双特异性抗体进行疾病的靶向治疗。通过基因改造，纳米抗体可以形成多聚体，大大提高了抗体与抗原的结合能力。通过基因工程形成纳米抗体融合蛋白可以带上酶或者毒素，融合蛋白在组织穿透，清除速度及稳定性上比普通抗体更有优势，可以用于低浓度抗原的检测。

三、科斯坦生物的优势

针对特定靶点的纳米抗体定制服务

科斯坦可以提供针对特定靶点的特异性纳米抗体定制服务，包括抗原检测，羊驼免疫，采血，效价检测，纳米抗体噬菌体库构建及淘选，特异性高亲和力纳米抗体筛选，表达，检测一条龙服务。亲和力可以达到10^-8~10^-10M级别。

四、案例展示

针对靶点B的特异性纳米抗体定制服务:

1. 靶点B免疫羊驼，进行四轮免疫后采血提取PBMC，经RNA提取，反转录获得cDNA后扩增获取VHH可变区片段

2.免疫羊驼纳米抗体库的构建:

将获得的VHH可变区片段连入噬菌体展示载体，电转宿主菌，最终获得库容为8.76*10^9纳米抗体库，插入正确率为100%

3.免疫羊驼纳米抗体库的淘选及筛选:

利用构建的免疫羊驼纳米抗体库，针对靶点B蛋白，完成三轮淘选，其淘选富集度如下:

筛选96个克隆，其中阳性克隆共94个，阳性率为97.9％

排除重复序列，最终获得了7条不同的抗体序列。将这些抗体序列表达成可溶性的VHH抗体蛋白，进行再次验证，结果如下：

随机挑选两条抗体蛋白进行亲和力测定，结果如下：

R1P1-A10:KD:6.49E-09M

R1P1-H12:KD:1.52E-07M

五、咨询与订购

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