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- 产品名称： T4 DNA Ligase
- 产品货号： CSCE1106
- 货期： 现货
- 价格与订购： 160
- 数量：
库存： 100
- 规格： 40KU
- 产品信息
- 如何订购
产品概述
T4 DNA Ligase可催化dsDNA平末端或粘性末端相邻核酸的5'磷酸末端和3'羟基末端形成磷酸二酯键，还可催化RNA和双链中的ssDNA或RNA链连接，但不能催化全单链核苷酸连接。适用于标记RNA 3'-末端，环化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
产品组分
| 组分 | CSCE1106(40,000 U) |
| T4 DNA Ligase (400 U/μl) | 100 μl |
保存条件
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
适用范围
1. DNA片段和载体DNA的连接。
2. DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
单位定义
在20μl的连接反应体系中，6μg的λDNA-HindⅢ的分解物在16℃下反应30 min时，有50%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
反应过程
1.在微量离心管中制配制连接反应体系：
灭菌蒸馏水 To 10 μl
10 × Ligase Buffer 1 μl
插入片段a 0.3 pmol
载体DNAb 0.03 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl) 1 μl
a. 插入片段与载体的摩尔比应在3:1 - 10:1之间。
b. 平末端载体与DNA片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
2. 16℃过夜反应
3. 连接产物转化
①在冰上解冻克隆用的化学感受态细胞(如：DH5α Competent cell)。
②取10 μl连接产物加入到100 μl感受态细胞中，轻弹管壁混匀(请勿振荡混匀)，冰上静置30 min。
▲ 连接产物转化体积最多不应超过所用感受态细胞体积的1/10。
③ 42℃水浴热激45 sec后，立即置于冰上冷却2 - 3 min。
④加入900 μl SOC或LB培养基(不添加抗生素)，37℃摇菌1 h(200 - 250 rpm)。
⑤将相应抗性的LB平板固体培养基在37℃培养箱中预热。
⑥ 5,000 rpm(2,400 × g)离心5 min，弃掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。⑦ 37℃培养箱中倒置培养12 - 16 h。
Note
For research use only .
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