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- 产品名称： DNaseⅠ, RNase-Free
- 产品货号： CSME0108
- 货期： 现货
- 价格与订购： 300
- 数量：
库存： 100
- 规格： 1KU
- 产品信息
- 如何订购
产品概述
DNaseⅠ(脱氧核糖核酸酶Ⅰ)，即DeoxyribonucleaseⅠ，是一种可消化单链或双链DNA的脱氧核糖核酸内切酶，它识别并切割磷酸二酯键，产生5'端为磷酸基团，3'端为羟基的单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸。DNaseⅠ的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子Mg2+、Mn2+等激活。在Mg2+存在的情况下，该酶可随机识别并切割双链DNA任意一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的情况下，可识别并切割DNA两条链上几乎相同的位点，产生平末端或有1 - 2个核苷酸突出的粘末端DNA片段。
产品组分
| 组 分 | CSME0108 (1,000 U) |
| DNaseⅠ(2 U/μl) | 0.5 ml |
| 10×Reaction Buffer | 1.25 ml |
保存条件
-30 ~ -15℃保存。运输条件：≤0℃。
单位定义
37℃ 10 min，将能够完全降解1 μg pUC19质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
纯度：≥90%；
RNase残留检测：使用100 U本品，参照RNaseAlert QC System说明书未检测到RNase残留；
功能检测：投入500 ng 人源基因组DNA，经1 U DNaseⅠ处理后，进行两对质控引物的qPCR检测，清除效率>99.9%。
适用场景
适用于RNA提取、体外转录、RT-PCR实验中DNA的去除，DNaseⅠ印迹(DNaseⅠ footprinting)，缺口平移 (nicktranslatioin)，DNA随机片段文库构建等分子生物学实验。
注意事项
1. 在使用本品进行RNA样品中DNA的清除实验时，可在反应体系中添加Murine RNase Inhibitor以保护RNA不被降解。
2. 部分实验条件下，DNaseⅠ的最佳使用量需要通过实验进行调整。
3. 失活或抑制：加入终浓度为5 mM的EDTA并经过65℃加热10 min，或通过酚氯仿抽提可使DNaseⅠ失活。此外，使用金属离子螯合剂， 达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50 - 100 mM以上盐浓度均对DNaseⅠ的活性有显著抑制作用。
应用实例
体外转录后模板DNA的去除
1. 每0.5 μg模板DNA的转录反应体系中加入1 U DNaseⅠ；
2.用移液枪轻轻吹打混匀，37℃ 15 min；
3.酚/氯仿抽提失活DNaseⅠ。
Note
For research use only .
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