M-MLV(H-) Reverse Transcriptase是通过体外大肠杆菌表达体系分子进化技术筛选获得的全新逆转录酶，与原始逆转录酶相比，MMLV(H-) Reverse Transcriptase大幅提高了热稳定性，在50℃的半衰期超过4h，可将逆转录温度提高至50-55℃，避免RNA复杂二级

结构对cDNA合成的抑制，可有效合成高质量的cDNA。同时，M-MLV(H-) Reverse Transcriptase增加了多个点突变，增强了模板亲和

力和行进性，使得全长cDNA的合成能力有了大幅度提升，对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于富含多糖多酚的植

物组织RNA的逆转录反应。

RT-PCR扩增；

链cDNA合成；

制备cDNA探针；

合成具有高比例全长cDNAs的cDNA文库。

防止RNase污染

请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase-free。

引物选择

1.后续实验为PCR

如果模板为真核生物来源，一般情况下首选Oligo dT，与真核生物mRNA的3' Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。

基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT或

Random hexamers重新进行逆转录。

Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA，rRNA，tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂

二级结构或GC含量较高，或模板为原核生物来源，使用Oligo dT或基因特异性引物(GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random 

hexamers为引物。

2.后续实验为qPCR

将Oligo dT与Random hexamers混合使用，可使mRNA的各个区域cDNA合成效率相同，有助于提高定量结果的真实性和重复性。