辅助试剂、试剂盒_武汉科斯坦生物科技有限公司

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产品介绍

本试剂盒采用先进的硅胶膜吸附技术，高效专一地结合质粒DNA，操作简单、快速。仅需20min 。3-5mL可提取多至20μg 的质粒DNA。

产品特点

本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

内装

操作步骤

1.挑取菌落于3-5ml含有抗生素的LB培养基中37℃振荡培养18-24小时。

注意:在有氨苄抗性的LB培养基中培养建议不超过20小时;若为-80℃甘油冻存的菌液，请先涂板后挑取新的菌落进行培养。

2.收集菌液至1.5ml离心管中，12000rpm离心2分钟，弃上清。

注意:菌液较多时可通过多次离心将菌体沉淀于离心管中，尽量将上清吸除干净;菌体量不宜过多，否则会造成菌体裂解不充分。

3.加入250ulC1溶液(请先加入RNaseA)，重悬菌体。

注意:建议用1ml移液器重悬菌体并充分混匀，有条件时使用涡旋振荡器彻底悬浮菌体;已加入RNaseA的C1溶液应于4℃保存。

4.沿管壁加入250ulC2溶液，上下轻柔颠倒3次，室温静置3分钟。

注意:切忌剧烈振荡;静置时间不应超过5分钟，以免造成DNA断裂。

5.加入350ulC3溶液，上下颠倒7-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。

注意:C3溶液加入后应立即混匀，避免形成局部沉淀;切忌混匀时剧烈振荡。

6室温12000rpm离心10分钟，小心的将上清转移至吸附柱中(吸附柱放入收集管中)。

注意:离心采取最高速，转速不小于12000rpm，时间不得小于10分钟;吸取上清时避免吸到白色沉淀，若上清中还有微小白色沉淀可再次高速离心后取上清。

7装有上清的吸附柱室温12000rpm离心30秒，弃掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

8.向吸附柱中加入500ulCB溶液(请先加入无水乙醇)，室温12000rpm离心30秒，弃掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意:加入的无水乙醇比例低可能会将DNA部分洗脱掉，影响质粒提取得率。

9.重复步骤8一次。

注意:此步骤目的是洗去吸附柱上的盐和其他离子，不应省略。

10.室温12000rpm离心2分钟，彻底去除吸附柱中的漂洗液，丢弃收集管，将吸附柱置于一个新的离心管中。

11开盖室温静置5分钟，向吸附柱中间部位的吸附膜滴加30-50uEB溶液。

注意:乙醇的残留会影响后续的实验，一定要将乙醇挥发干净。

12.扣盖室温静置5分钟，室温12000rpm离心2分钟将质粒溶液收集至离心管中。

注意:可将收集的质粒溶液再次加入至吸附柱中离心，也可将EB溶液温浴至70℃后再进行洗脱，以提高质粒回收浓度;洗脱液的pH值会影响洗脱效率，若用水洗脱，应确保水的pH值在70-8.5范围内。

5ml菌液质粒提取得率参考表

质粒的检测

实验室常用1%琼脂糖凝胶电泳检测质粒纯度，出现2条或3条带时可能为质粒的开环，线性，超螺旋结构。

测质粒浓度时，OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应在1.7-1.9范围内，1.8为最佳，低于1.8表明可能有蛋白质污染，大于1.9表明可能有RNA污染。

Note

For research use only .