ELISA试剂盒_武汉科斯坦生物科技有限公司

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产品简介

在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物；经光谱扫描，该蓝色复合物在600nm处有最大吸收峰，在一定的蛋白浓度范围（1-1000μg/mL）内，其颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。

测试盒组成和配制

所需的仪器和用品

酶标仪、96孔板、离心机、可调式移液器、研钵和蒸馏水。

四、蛋白含量检测：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：

称取约0.1g组织，加入1mL提取液（提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐水）冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。

【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如10倍。实验前可以先选2个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。

②细菌或细胞样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取500万细菌或细胞加入1mL提取液；超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），12000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如10倍。实验前可以先选2个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。

③液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。

【注】：依据研究经验，一般需将样本稀释到适当倍数再进行测定，如10倍。实验前可以先选2个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。

2、上机检测：

① 酶标仪预热30 min以上，设定波长为600nm。

② 在96孔板中依次加入：

【注】：1.确保蛋白浓度在0~100µg/ml范围内，否则需要做相应稀释，即最好使A测定的值低于1.2；稀释倍数D带入公式计算。

2.去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1mol/L的NaOH溶液对该实验会有影响。

结果计算

1、标准曲线：y = 3.8457x + 0.0136；x是标准品浓度（mg/mL），y是△A。

2、蛋白含量 (mg/g 鲜重)=[(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷(W×V1÷V)×D

=0.26×(△A-0.0136)×D÷W

3、蛋白含量(mg/mL)= [(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷V1×D=0.26×(△A-0.0136)×D

V---提取液体积：1mL； V1---加入粗提液体积：0.04mL；

W---样本质量：g； D---稀释倍数，未稀释即为1。

附：标准曲线制作过程：

1标准品母液（0.5mg/mL）。

2把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。

3依据测定管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。