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- 产品名称: BL21(DE3) Chemically Competent Cell
- 产品货号: CSKT104L
- 货期: 现货
- 价格与订购: 360
- 数量:
- 规格: 200×100ul
- 产品信息
- 如何订购
产品规格
Cat No. CSKT104L (100μl×200支)
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存条件:-80℃
保质期: 6个月
基因型
F– ompT hsdS(rB–mB–) gal dcm(DE3)
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产品说明
BL 21(DE3)感受态细胞用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于BL21的染色体上。适合于非毒性蛋白的表达。BL 21(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达106 ~107cfu/μg DNA。
操作方法
一 、热激转化法
1.从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管 中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
2.42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3.向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4.根据实验要求(质粒),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平板,37℃过夜。
二、10分钟快速转化法
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. BL 21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质 粒)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水 渍。锚点
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1. 刚刚化冻的细胞,转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
6. 表达感受态不建议用于重组连接产物转化。
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Note
For research use only .