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- 产品名称： SplintR Ligase
- 产品货号： CS1359
- 货期： 现货
- 价格与订购： 1000
- 数量：
库存： 5
- 规格： 2000U 10KU
- 产品信息
- 如何订购
产品说明
SplintR 连接酶也称为PBCV-1 DNA连接酶或Chorella病毒DNA连接酶，在ATP作为辅助因子条件下，在模板RNA链存在下，高效连接与RNA链互补的相邻的DNA的5´磷酸末端和3´羟基末端。被连接的可以是两条DNA单链；也可以是一条DNA的5’端与3’端与RNA模板以环状形式配对，连接成一个环状的DNA单链。因此非常适合基于锁式探针(Padlock probe)或上下游双探针的microRNA检测。锁式探针是一种较长的单链DNA寡核苷酸片段，两个末端和靶标序列毗邻互补，探针中间的一段序列不与靶标序列配对，可以作为通用引物的结合位点。本酶对于平末端、粘性末端的连接、以及双链DNA、双链RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口都可以连接。SplintR 连接酶的这种活性可以用于miRNAs等微小RNA和mRNA 的检测与单核苷酸多态性SNP分析。在二代测序和分子诊断等众多领域中，SplintR是富集目的基因的理想选择。SplintR连接酶是RNA检测的最佳用酶，其对RNA介导固定的DNA底物亲和性强（米氏常数 Km = 1 nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定RNA。
SplintR 连接酶在广泛条件下，例如10 µM - 1 mMATP，pH 6.5–9.0，均有活性。其中最优反应条件为高于5 mM Mg2+，pH 7.5 - 8.0。37°C反应，补充5 mM Mn2+可以提高反应活性。高于100 mM一价阳离子抑制酶活性。相比dA/U碱基对, 5’端dC/G与dG/C 碱基对对连接反应具有部分抑制作用，特别是相邻的碱基对也是C/G的情况。
SplintR 连接酶在广泛条件下，例如10 µM - 1 mMATP，pH 6.5–9.0，均有活性。其中最优反应条件为高于5 mM Mg2+，pH 7.5 - 8.0。37°C反应，补充5 mM Mn2+可以提高反应活性。高于100 mM一价阳离子抑制酶活性。相比dA/U碱基对, 5’端dC/G与dG/C 碱基对对连接反应具有部分抑制作用，特别是相邻的碱基对也是C/G的情况。
活性定义
1单位指在温度为25℃，1× SplintR Ligase 反应缓冲体系的条件下，15min内连接50%的2pmol DNA链（与RNA杂交配对形成的带缺口的DNA/RNA底物）所需的酶量。
活性测定条件
50 mM Tris-HCl ，1 mM ATP，10 mM MgCl2，10 mM DTT(pH 7.5 @ 25℃)，25℃ 温育。
浓度
25U/μl
保存条件
-20℃保存
特点与适用范围
1. 基于DNA探针连接进行RNA检测
2.SNP或剪接变异检测
3.基于锁式探针(Padlock probe)的microRNA检测
4.互补RNA序列配对的单链DNA连接反应
5. RASL-seq（RNA-mediated oligonucleotide annealing, selection, and ligation with next-generation sequencing）
6.热失活：65℃ 加热20min。
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Note
For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.
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