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- 产品名称： Human IL-6 ELISA Kit
- 产品货号： CSK00014
- 货期： 现货
- 价格与订购： 2800
- 数量：
库存： 100
- 规格：
- 产品信息
- 如何订购
产品英文名（Product Name）
Human IL-6 ELISA Kit
产品描述（Description）
本试剂盒采用定量双抗夹心ELISA分析技术，将抗人IL-6单克隆抗体预先包被在酶标板上，之后将标准品和分析样品加入到微孔中，样品中IL-6抗原会被预包被的抗体捕获，清洗掉未结合的物质后，将生物素标记的抗人IL-6单克隆抗体加入到微孔中反应，形成夹心复合物，再加入HRP酶标记的亲和素，清洗掉未结合的抗体及酶试剂之后，将显色底物溶液添加到微孔中显色，显色强度与样品中IL-6浓度成正比。
本试剂盒用于测定细胞培养上清液、血清和血浆中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。
储存条件（Storage）
收到试剂盒后请将标准品、检测溶液 A、检测溶液 B 以及预包板保存于-20℃，封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。 试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。
运输方式（Shipping）
蓝冰运输。
Note
For research use only
使用方法（Standard Operating Procedure）所需设备及试剂
• 450 nm滤光片酶标仪，含540 nm或570nm校正波长更佳
•单道或多道微量移液器，移液器枪头
•去离子水
• 500 mL量筒
•样品稀释管或不同规格EP管
•吸水纸
一、样品收集和储存
1.细胞培养上清液：1000x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复
冻融。
2.血清样本：全血室温放置60分钟或4℃过夜，然后1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后
于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
3.血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆，样品采集后30分钟内1000 x g离心15分
钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
二、试剂准备
使用前将所有试剂和标本置于室温平衡。
1.浓缩清洗液: 如果浓缩液中有晶体析出，加热至室温并轻轻混合，直到晶体完全溶解，25mL浓缩清洗液使用离子水定容至500mL，得到清洗工作液。
2.用0.5ml标准品稀释液溶解IL-6标准品冻干粉，溶解后标准品母液浓度为1600pg/mL。震荡混匀后静置10分钟，用移液枪取100μL 标准品母液至EP管中, 再取700μL标准品稀释液至EP管中，得到第一个标准点200pg/mL，依次进行倍比稀释操作得到共计7个标准点200 pg/mL、100 pg/mL、50 pg/mL、25 pg/mL、12.5pg/mL、6.25pg/mL、3.125pg/mL最后再以100ul标准品稀释液为零标准（0 pg/mL），共计8个标准点，建议每个标准点至少做2个平行孔。
3.检测溶液A（生物素标记），使用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液1:100稀释至工作浓度。
4.检测溶液B（HRP标记），使用前震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液1:2000稀释至工作浓度。
5.显色液: 避光保存，显色时100μL /孔。
6.终止液：显色完毕后50μL /孔。
三、使用前将所有试剂和样品置于室温。建议对所有标准品、对照品和样品进行一式两份的分析。
1.按照前面章节的指示准备所有试剂和准备工作。
2.从板架上取下多余的微孔板条，将其放回装有干燥剂包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3.每孔加入100μL标准品或样品，用封板膜封住，37℃孵育60分钟。
4.弃去孔内液体，每孔加入 300μL的清洗液清洗，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸
上轻拍，使残留在孔内的液体全部去除，重复洗板 3 次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多道移液器
或自动洗板机来完成。
5.每孔加入100μL检测溶液A（生物素标记），用新的封板膜封住，37℃孵育30分钟。
6.重复步骤4中的洗板程序。
7.每孔加入100μL检测溶液B（HRP标记），用新的封板膜封住。37℃孵育30分钟。
8.重复步骤4中的洗板程序。
9.每孔加入100μL显色液，37℃避光显色10分钟。
10.每孔加入50μL终止液，孔里的颜色应该由蓝色变至黄色，如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀，
轻轻震动酶标板板使颜色均一。
11.擦干酶标板底部水气，立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度值（O.D.值），如果波长
校正可用，则设置为540 nm或570 nm，如果波长校正不可用，则从450 nm的读数中减去540 nm或
570 nm的读数，这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差，如果没有校正波长，可直接读取450 nm
的读数，但读值有可能会更高、更不准确。
四、标准曲线制作
每个标准品和样品的复孔平均值O.D.，减去零标准孔平均值O.D.后，以标准品的浓度为纵坐标，O.D.值为横坐标，绘出标准曲线（R2值越趋近于1曲线越精确），然后再将样品的平均值O.D.带入标准曲线的回归方程式，计算出样品浓度。
如果样品已经稀释，从标准曲线上算出的浓度须乘以稀释系数，即为样品的实际浓度。
五、标曲案例
标准曲线仅用于演示， 每次实验均需生成单独的标准曲线。
六、检测范围
3.125pg/mL—200pg/mL
七、最低检测限(MDD)
0.5pg/mL
MDD是测试20个零标准（稀释液）的平均O.D.值上加两倍标准差后计算相应的浓度来确定的。
八、精密度
批内差： CV<12%
批间差： CV<15%
九、稳定性
试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。
十、回收率
分别于培养基，血清和血浆样本中加入低，中，高浓度的 IL6标准品，测定值与理论值的比率即为回收率。
十一、线性
分别于培养基，血清和血浆样本中加入一定量的 IL6标准品，使用稀释液倍比稀释成 1:2，1:4，1:8，1:16 的待测样本，稀释后样本中 IL6 含量的测定值与理论值的比率即为线性范围。
十二、实验细节说明
1.在试剂盒标签上的有效期内使用，不要与其他厂家的试剂盒混合使用。
2.如果样品检测值超出标准曲线范围，可使用适当的稀释液稀释样品并重新测定，或预估样品中IL6浓度，在实验之前预先稀释数个梯度同时进行测定。
3.为避免交叉污染，不同标准品、样品、试剂的加样需更换移液枪头，每管试剂使用单独的容器储存。
4.在孵育过程中贴紧封板膜。
5.显色液避光保存，临用前15分钟从冰箱取出在室温平衡。
6.浓缩清洗液（20×）需使用去离子水1：20稀释至工作浓度，去离子水不包含在试剂盒中，需实验人员自备。
7.终止液为酸性溶液，具有轻微腐蚀性，使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接触，使用大量清水冲洗后观察接触部位反应，如情节严重请及时就医。
8.试剂盒酶标板条可按需拆卸使用，已开封的试剂盒建议在1个月内使用，未开封的试剂盒以包装盒上保质期为准。
回收率
分别于培养基，血清和血浆样本中加入低，中，高浓度的 IL6标准品，测定值与理论值的比率即为回收率。
| 样本类型 | 平均回收率（%） | 回收率范围（%） |
| 血清（n=5） | 92 | 85-98 |
| EDTA 血浆 (n=5) | 93 | 82-101 |
| 肝素 血浆(n=5) | 88 | 87-97 |
| 培养基(n=5) | 94 | 92-101 |
线性
分别于培养基，血清和血浆样本中加入一定量的 IL6标准品，使用稀释液倍比稀释成 1:2，1:4，1:8，1:16 的待测样本，稀释后样本中 IL6 含量的测定值与理论值的比率即为线性范围。
| 样本类型 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 |
| 血清（n=5） | 92-101% | 91-105% | 89-107% | 88-110% |
| EDTA 血浆 (n=5) | 93-103% | 92-111% | 83-112% | 88-110% |
| 肝素 血浆(n=5) | 95-108% | 94-112% | 91-111% | 95-109% |
| 培养基(n=5) | 94-105% | 93-111% | 89-105% | 85-112% |
| 样品名称 | 规格 | 描述 | 推荐储存条件 |
| IL6抗体预包板 | 1板 | 96孔聚苯乙烯微孔板（12条*8孔），预包被抗人IL-6特异性单克隆抗体。 | 密封状态放置于-20℃保存。 |
| IL6标准品 | 1瓶 | 800pg重组人IL-6冻干粉（含防腐剂），使用前复溶于0.5mL标准品稀释液，终浓度为1600pg/mL。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 检测溶液A
| 1管 | 120μL Biotin标记IL-6单克隆抗体（含防腐剂），临用前用抗体稀释液1:100稀释至工作浓度。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 检测溶液B
| 1管 | 12μL HRP标记的链酶亲和素（含防腐剂），临用前用抗体稀释液1:2000稀释至工作浓度。 | 放置于-20℃ 保存。 |
| 标准品稀释液 | 1瓶 | 25 mL稀释液（含防腐剂），用于标准品、上清、血清、血浆的稀释。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 检测溶液稀释液 | 1瓶 | 25 mL稀释液（含防腐剂），用于检测溶液A和检测溶液B的稀释。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 浓缩清洗液 | 1瓶 | 25 mL （20×）浓度的清洗液（含防腐剂），临用前用去离子水1:20稀释至工作浓度。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 显色液 | 1 瓶 | 12 mL TMB（四甲基联苯胺）。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 终止液 | 1 瓶 | 6 mL 2M 酸液。 | 放置于4℃ 保存。 |
| 封板膜 | 4 片 | 用于实验中封闭酶标板。 | 放置于常温保存。 |
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