辅助试剂、试剂盒_武汉科斯坦生物科技有限公司

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产品介绍

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,以下简称AP)分子量140,000Da,在分子生物学和蛋白质研究中的主要应用是从DNA中去除5'-磷酸基团或作为免疫分析（如ELISA）的报告系统。在免疫分析测试中，酶通常与特定的一级或二级抗体结合，其活性用显色（或发光）底物检测。

本试剂盒可以帮助实验者快速实现AP与抗体的偶联。

基本原理

本试剂盒利用抗体和AP上游离的伯氨基（-NH2），采用定向对接偶联技术将抗体分子与AP共价偶联，主要特点：

1、试剂盒组分齐全，操作简单，只要按照操作步骤进行便可得到高品质AP偶联抗体；

2、本试剂盒所配置的AP为高纯度，高活性酶，催化发光/显色效率更高；

3、本试剂采用定向偶联技术，AP酶和抗体都不会发生自连，保证偶联物的特异性和均一性；

试剂盒已经提供材料

其他需要自备试剂材料

待标记的生物分子；

移液器及吸头；

去离子水。

试剂盒储存

试剂盒抗体修饰试剂放在-20˚C，其余组分放在2-8℃可保存6个月以上。

试剂盒操作流程

1.抗体的修饰

1）取待标记抗体（纯度>90%），浓度调整到 5mg/ml左右为宜，按照每mg抗体加入

2μl 抗体修饰试剂溶液，轻轻混匀，在室温下避光搅拌反应 90分钟；【如果抗体量太少，抗体修饰试剂溶液加入量不少于0.5ul】

2）反应完毕后，将其转入30KMWCO超滤管，用标记缓冲液超滤3-5次（每次12000rpm 5min），每次管芯内液体体积不超过原体积1/4为宜，最后一次超滤完成，管芯内液体即为修饰的抗体。

2.活化AP与抗体偶联

1）用标记缓冲液复溶活化AP冻干粉，得到活化AP溶液，浓度调整为5mg/ml（如，按50ug活化AP冻干粉加入10ul标记缓冲液复溶）；

2）将修饰抗体与活化AP溶液，按照质量比1:2.5比例（每mg修饰抗体对应2.5mg活化AP溶液,50ug 活化AP可以标记20ug抗体）混合，室温避光反应2小时；

3）将封闭试剂管中加入5ul DMSO,配置成10mg/ml封闭试剂溶液；按照每0.5mg抗体5ul的体积比例加入上述步骤2）反应产物中，封闭未反应完的活性基团；【如果抗体量太少，抗体封闭试剂溶液加入量不少于0.5ul】

4）标记好的抗体分装，加入适当保护剂，-20℃保存备用。

注意事项

1）本试剂盒中抗体修饰试剂和封闭试剂为高活性试剂，请-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿冻存。

2）试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒，会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

3）本试剂盒中活化AP冻干粉需要避光低温保存，一旦复溶请一次性使用完；标记过程尽量保证其避光；

4）封闭剂需现用现配，干粉溶解后不能长期保存；

5）使用本试剂盒标记抗体，其抗体特异性要高，纯度不低于90%，最好使用单克隆抗体，溶液环境不含游离氨基，最好为PBS溶液；标记前抗体需去除NaN3和BSA，抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失，因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量；

6）由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化，因此修饰后抗体需尽快与活化的AP进行偶联；

7）本试剂盒中的超滤管为特殊处理的，可有效避免酶失活和蛋白吸附损失，市面超滤管可能会对标记效率造成影响。

8）本试剂盒中部分试剂为高活性试剂，对皮肤和身体有一定的危害，请全程戴手套操作；DMSO属微毒类，对人体皮肤有渗透性，对眼有刺激作用，使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。

Note

For research use only .