辅助试剂、试剂盒_武汉科斯坦生物科技有限公司

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产品介绍：

本FITC标记试剂盒提供了FITC快速标记所需全部试剂，用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗体/多肽或者其他大分子的标记,待标记物上的赖氨酸残基的游离ε-氨基可与FITC 发生亲核反应,形成硫脲连接而共价结合,形成的偶联物的稳定性很好，其反应原理如下:

FITC清除指示剂为蓝色，其为FITC的结构类似物，其数量为加入的FITC的20倍以上，在通过超滤管离心清除游离FITC的时候，如果超滤管中没有蓝色了，游离的FITC基本上被清除完毕。

产品特点：

l通过离心脱盐和去除游离的FITC,无需透析或者凝胶过滤；

l本试剂盒配备指示剂，确保游离FITC去除完全;

l 使用方法简单，无需额外准备试剂.

FITC标记使用量的计算：

每个反应中FITC试剂的使用量取决于待标记蛋白质氨基数目和总量。例如,通过我们实验数据分析表明,标记2mg/ml 的抗体（IgG ，150KD）,每毫升抗体溶液（2mg/mL）加入100µL的FITC(2mg/mL) 能达到最佳标记效果效果;其他蛋白的标记可以根据实际情况,参照此比例类推。

实验前准备：

1.仔细阅读使用说明书。

2.提前20min 从冰箱中取出试剂盒，使试剂盒各组分平衡至室温；

3.用FITC助溶剂（DMSO，使用前需要放在室温融化）溶解FITC。

特别提示：

A.溶解的活好FITC最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱内，一周内可以使用，但是标记效率会降低；

B.FITC助溶剂使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

操作步骤：（本操作步骤按照 1mg抗体的量进行标记）

1.取1mg 待标记抗体于超滤管中，并加入不超过超滤管最大体积的标记缓冲液， 12,000 g 离心 10min；可以重复此步骤多次；最后一次超滤完成，可以加入适量标记缓冲液调整抗体的浓度到2mg/mL左右；

A.超滤管的最大体积和最大截留分子量，本实例超滤管的最大体积为 0.5mL；

B.如果待标记抗体浓度低时，可先超滤离心浓缩；

C.如果待标记物含有游离的氨基（Tris,氨基酸或者其他干扰物，需要用标记缓冲液反复超滤确保其去除干净）。

2.加入溶解的FITC 50µL至上述超滤管中，并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育 60min以上；

3.标记结束以后加入 1/10体积的FITC清除指示剂至上述超滤管中；

4.12,000g 离心 10min；

5.加入适量标记缓冲液至上述超滤管中，并轻轻吹打混匀，12,000g 离心 10min。并重复操作多次，直至超滤管中没有蓝色，未标记的FITC被彻底清除干净；收集超滤管中的溶液，即为FITC标记抗体。

标记偶联比率的计算:

C是某个蛋白的一个常数；

MW是蛋白的分子量；

389是FITC的分子量；

195是偶联的FITC在490nm（PH13.0）情况下1mg/ml的吸光值；

(0.35ⅹA495)是FITC在280nm情况下吸光值的校正系数；

E0.1%是1.0 mg/ml的蛋白在280nm的吸光值。

选购之前客户需要根据待标记物的分子量大小和标记量选择最适宜的型号