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- 产品名称： DH 10β Chemically Competent Cell
- 产品货号： CSKT102L
- 货期： 现货
- 价格与订购： 360
- 数量：
库存： 5
- 规格： 200×100ul
- 产品信息
- 如何订购
产品规格
RAW264.7小鼠单核巨噬细胞
基因型
F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galE15 galK rpsL nupG λ-
icon 产品说明
DH 10β菌株来源于MC1061菌株，消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS的限制系统，使DH 10β感受态细胞适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA，允许构建更多具有代表性的基因组文库。recA1和endA1的突变有利于稳定和高纯度质粒DNA的提取。rpsL赋予其链霉素抗性，φ80lacZ∆M15 的存在使DH 10β可用于蓝白斑筛选。DH 10β感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg DNA。
操作方法
一 、热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后，吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中，加入质粒或连接产物，轻轻混匀，冰浴30分钟。
2. 42℃水浴热激60秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB（SOC培养基可提高2-3倍转化效率），37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收，倒置平板，37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
二 、10分钟快速转化法
注：在使用卡那霉素，四环素等作为筛选抗性时，需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率，当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时，该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基，在37℃ 180rpm孵育1小时，然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. DH 10β感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
注意事项
1. 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
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Note
For research use only .
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