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- 产品名称: Stbl3 Competent Cell
- 产品货号: CSKT110L
- 货期: 现货
- 价格与订购: 360
- 数量:
- 规格: 200×100ul
- 产品信息
- 如何订购
产品规格
Cat No:CSKT110L (100μl×200支)
pUC19(control vector): 100pg/μl 5 μl
保存条件: -80℃
保质期: 6个月
基因型
F- mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(Strr) xyl-5 λ-leu mtl-1 endA1+
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产品说明
Stbl 3感受态细胞是慢病毒载体系统推荐使用的感受态细胞。基因组含有重组酶recA13突变,可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性,不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19检测转化效率>109cfu/μg DNA。
操作方法
一 、热激转化法
1.从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,在冰浴中放置30分钟。
2.42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3.向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4.根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平 板,37℃过夜培养。
二、10分钟快速转化法
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. Stbl 3感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1. 刚刚化冻的细胞,转化效率最高。
2. 避免反复化冻。
3. 避免移液枪吹吸。
4. 整个操作过程要轻柔。
5. 重组产物不建议用10分钟快速转化法。
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Note
For research use only .