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- 产品名称： Phi29 DNA Polymerase
- 产品货号： CSC0827
- 货期： 现货
- 价格与订购： 2000
- 数量：
库存： 10
- 规格： 1250U
- 产品信息
- 如何订购
产品描述
Phi29 DNA Polymerase是从Bacillus subtilis噬菌体phi29中克隆的DNA聚合酶。Phi29 DNA Polymerase具有很强的链置换活性，可以实现 对DNA复杂结构解链与复制，在体外进行不依赖于热循环的等温DNA聚合反应。Phi29 DNA Polymerase具有很强的链亲合力，单次聚合反 应可以实现长达100 kb的连续聚合延伸，另外，Phi29 DNA Polymerase还具有很强的3’-5’外切校对活性，其保真度是Taq酶的1000倍，高 于目前绝大多数高保真酶的保真度，这保证了DNA合成的高保真性，非常适用于质粒的体外制备和全基因组合成。
产品组分
| 组成 | CSC0827-1（250U） | CSC0827-2（1250U） |
| Phi29 DNA Polymerase | 25ul | 125ul |
| 10×Phi29 DNA Polymerase Bufer | 1ml | 1ml |
储存条件
-30 ~ -15℃保存。有效期3年，避免反复冻融。
适用场景
等温扩增。
单位定义
一个单位指在30℃下10 min内将0.5 pmol dNTP结合到酸不溶性沉淀物所需的酶量。
使用方法
以环状质粒测序样本制备为例：
通过Phi29 DNA Polymerase的链置换活性和高保真的聚合酶活性，可极大的简化用于测序的环状质粒的制备过程。
1.样本制备
细菌培养液：取1 μl新鲜细菌培养物直接用于扩增反应。
平板上的菌落：挑取菌落(避免取到培养基)到 10 μl Nuclease-free ddH2O中并混匀，取1 μl用于扩增反应。
已纯化的质粒：质粒用Nuclease-free ddH2O稀释到1 ng/μl，取1 μl用于扩增反应。
2.按下列顺序配置反应体系：
| 组份 | 体积 |
|
Nuclease-free ddH2O
|
4 μl
|
|
10×Phi29 DNA Polymerase Buffer
|
1 μl
|
|
随机引物(100 μM)
|
2.5 μl
|
|
待扩增样品
|
1 μl
|
|
Total
|
8.5μl
|
3.95℃孵育3 min，立即置于冰上冷却5 min。
4.在上述反应体系中加入下列成分：
| 组份 | 体积 |
|
上一步产物
|
8.5 μl
|
|
dNTP 110mM)
|
1 μl
|
|
Phi29 DNA Polymerase
|
0.5 μl
|
|
Total
|
10 μl
|
5.震荡混匀并短暂离心收集。
6.30℃孵育过夜。
7.65℃孵育10 min失活Phi29 DNA Polymerase。
8.扩增产物经纯化后可用于测序及其他下游运用。
注意事项
（1）DTT浓度对于Phi29 DNA Polymerase活力影响较大，当10×Phi29 DNA Polymerase Buffer储存时间较长或经反复冻融后，可在反应 体系中补充 DTT至终浓度为4 mM。
（2） Phi29 DNA Polymerase具有很高的灵敏度及扩增效率，请使用Nuclease-free的枪头和PCR管，并避免其它反应组分污染。
（3）对于酶的操作需在冰浴上进行，以避免酶在室温长时间放置而影响酶的活性。
（4）进行等温扩增时，需自备额外的试剂，例如如2.5 mM dNTP、Random Primer (100μM)以及Nuclease-free H2O等。
（5）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
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Note
For research use only .
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